微炎症环境中肠上皮细胞与巨噬细胞共培养后MAPK,NF

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作者：

陈玉娇，晏杰

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摘要：

目的观察微炎症环境中肠上皮细胞与巨噬细胞共培养后MAPK,NF-κB通路改变,探究固有免疫系统维持肠道免疫平衡的细胞间交流机制.方法将人结肠腺癌上皮细胞株Caco2,HCA7分别与人白血病单核巨噬细胞株THP1构建Transwell小室共培养体系,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)5 ng/mL刺激不同时间后,采用Western blotting法检测三种细胞单独及共培养后的MAPK通路[磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK),磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)]及NF-κB通路[磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα),磷酸化核蛋白(p-p65)]相关蛋白表达.将对数生长期的THP1细胞分为Caco2培养基组和DMEM培养基组,离心后分别重悬于Caco2条件培养基和DMEM完全培养基,加入TNF-α5 ng/mL刺激不同时间后,采用Western blotting法检测细胞p-ERK,p-p38,p-IκBα,p-p65蛋白表达,采用RT-PCR法检测细胞TNF-α相关细胞因子[白细胞介素(IL)-8,IL-6,IL-1β]和CC亚族趋化性细胞因子2(CCL2),CCL3 mRNA表达.结果在单独培养的细胞中,Caco2细胞在TNF-α刺激30 min后p-ERK,p-p38,p-p65表达均升高,THP1细胞在TNF-α刺激90 min后p-p38,p-IκBα,p-p65表达均升高(P均